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闡述了熒光分光光度計(jì)檢出限測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定過(guò)程和方法， 對(duì)不確定度來(lái)源進(jìn)行分析， 并 終給出測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度。

熒光分光光度計(jì)是用來(lái)測(cè)定熒光物質(zhì)的性質(zhì)和含量 的分析儀器， 具有靈敏度高、 選擇性強(qiáng)、 用樣量少、 方 法簡(jiǎn)便、 工作曲線線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)， 可以廣泛應(yīng)用于 生命科學(xué)、 有機(jī)和無(wú)機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。 1 概述 1.1 測(cè)量依據(jù) 根據(jù) JJG 537—2006 《熒光分光光度計(jì)》 的相關(guān)要 求進(jìn)行測(cè)量。 1.2 環(huán)境條件 環(huán)境溫度 （20±10） ℃， 且相對(duì)穩(wěn)定； 相對(duì)濕度不 大于 85%； 電源電壓 (220±22) V。 1.3 計(jì)量標(biāo)準(zhǔn) 計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)為硫酸奎寧熒光標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)， 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)號(hào)： GBW (E) 130100； 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值： 98.6%； 相對(duì)擴(kuò)展 不確定度： Urel=0.5%， k=2。 1.4 被測(cè)對(duì)象 熒光分光光度計(jì)， 對(duì) 于 配 制 A 類(lèi)單色器的儀器， 其檢出極限為不大于 5×10-10 g/mL； 對(duì)于配制 B 類(lèi)單色 器的儀器， 其檢出極限為不大于 1×10-8 g/mL。 1.5 測(cè)量方法 按照規(guī)程規(guī)定的檢定條件， 使儀器處于運(yùn)行狀 態(tài)。 用 0.05 mol/L 硫酸溶液做空白溶液， 選取規(guī)定濃度 硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液。 靈敏度置， 選擇適當(dāng)?shù)莫M縫 寬度。 根據(jù)激發(fā)波長(zhǎng)在 350 nm、 發(fā)射波長(zhǎng)在 450 nm 左 右的原則， 設(shè)定兩側(cè)的波長(zhǎng)或選擇濾光片。 對(duì)空白溶液 與標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行連續(xù)交替 11 次測(cè)量。 按規(guī)程中的公式 計(jì)算儀器檢出限。 2 數(shù)學(xué)模型及不確定度傳播率 2.1 數(shù)學(xué)模型 被測(cè)熒光分光光度計(jì)檢出限的計(jì)算公式為： （1） 式中： DL——檢出限； ——11 次測(cè)量的平均熒光強(qiáng)度； c——標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度； s——單次測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 2.2 不確定度傳播率 儀器檢出限的不確定度傳播率計(jì)算公式為： （2） 2.3 靈敏系數(shù) 公 式 （2） 中的 靈 敏 系 數(shù) c1= ， c2= ， c3= 。 3 標(biāo)準(zhǔn)不確定度評(píng)定 按照規(guī)程要求， 以一臺(tái)型號(hào)為 F2500 的熒光分光光 度計(jì)為例， 其檢出限測(cè)量數(shù)據(jù)如表 1 2 所示 F ?。

4 標(biāo)準(zhǔn)不確定度的評(píng)定 4.1 溶液測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度分量 u （s） 計(jì)算出單次測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)偏差 s=0.553， 規(guī)程中規(guī)定 測(cè)量重復(fù)性次數(shù)為 3 次， 則溶液測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度分量 = =0.319 4.2 由儀器的直接測(cè)量結(jié)果引入的不確定度分量 （1） 用儀器直接測(cè)量空白溶液， 由于時(shí)間、 環(huán)境溫 度等影響， 引起零點(diǎn)漂移的偏差不超過(guò) 0.5%， 其值符 合均勻分布， 其不確定度為 =0.5%× =0.239 1 （2） 用儀器直接測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液， 由于時(shí)間、 環(huán)境溫 度等影響， 引起零點(diǎn)漂移的偏差不超過(guò) 1.5%， 其值符 合均勻分布， 其不確定度為 =1.5%× =0.911 5 4.3 由標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋配制引入的不確定度分量 u （c） 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度計(jì)算公式為： c= （3） 式中： c——標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度； m——硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量； V——稀釋體積。 （1） 配制 500 mL 濃度為 1×10-5 g/mL 的硫酸奎寧儲(chǔ) 備液時(shí)， 稱(chēng)量硫酸奎寧固體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量為 5.00 mg。 天平稱(chēng)量引入的不確定度為天平檢定的大允許誤差± 0.5 mg， 由天平稱(chēng)量引入的不確定度分量為 u （c1） = mg， 符合正態(tài)分布。 傳播系數(shù)為 mL-1 ， 則 u （c1） =5.8×10-7 g/mL （2） 配置 500 mL 濃度為 1×10-5 g/mL 的硫酸奎寧儲(chǔ) 備液時(shí)， 500 mL 容量瓶檢定合格達(dá)到 A 級(jí)的大允許 誤差為±0.25 mL， 由容量瓶定容引起的不確定度分量為 u （c2） = =0.144 mL， 符合 正 態(tài) 分 布 。 傳 播 系 數(shù) 為- ， 則 u （c2） =2.9×10-9 g/mL 4.4 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)硫酸奎寧引入的不確定度分量 u （c3） （1） 硫 酸奎寧熒光標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度為 Urel= 0.5%， k=2 （根據(jù)標(biāo)物證書(shū)得到）， 分量為 0.25%， 按照 稱(chēng)樣量換算成不確定度為 0.002 5×0.005=1.25×10-5。

g， 傳播系數(shù)為 mL-1 ， 則 u （c3） =5.8×10-7 g/mL （2） 標(biāo)準(zhǔn)溶液是由儲(chǔ)備液按 1： 10、 1： 10、 1:100 分 3 次稀釋得到的， 在此過(guò)程中所用到的玻璃量器有 25 mL 移液管、 250 mL 容量瓶等， 其合成后的不確定 度分量 u （c4） =1×10-11 g/mL 4.5 標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表5 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度 以上標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量合成的標(biāo)準(zhǔn)不確定度 uc （DL） = =5.2×10-9 g/mL 6 擴(kuò)展不確定度 測(cè)量熒光分光光度計(jì)檢出限的相對(duì)擴(kuò)展不確定度為 U=1.0×10-8 g/mL， k=2 7 結(jié)束語(yǔ) 由計(jì)算結(jié)果可以看出， 以校準(zhǔn)熒光分光光度計(jì)檢出 限項(xiàng)目為例， 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稱(chēng)量和標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)本身的不確定度 3 個(gè)因素對(duì)評(píng)定結(jié)果的影響較大。 這 就要求選取硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)盡量選取不確定度小的 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)， 稱(chēng)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)盡量選取有效數(shù)字多的 一級(jí)天平， 同時(shí)在標(biāo)準(zhǔn)溶液配制時(shí)選用經(jīng)過(guò)檢定的玻璃 量具仔細(xì)稱(chēng)量， 盡量減小人為誤差， 這樣才能對(duì)后的 結(jié)果做出準(zhǔn)確評(píng)定。